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混合纤维素微孔滤膜用于液体藻类的冷冻扫描电镜样品制备

[导读]混合纤维素微孔滤膜用于液体藻类的冷冻扫描电镜样品制备

应用冷冻扫描电镜技术(Cryo-SEM)观察液体藻类样品时,一般使用普通定性滤纸作为基底,将藻细胞吸附于滤纸上后粘台,然后进行后续制样和观察。但是,滤纸的纤维粗,孔隙大小和分布不均一,作为电镜观察的背景并不理想。

由于滤纸的孔隙较大,体积较小的藻细胞会进入滤纸纤维的孔隙中,甚至透过滤纸,导致无法在滤纸表面富集足够多且分散均匀的细胞,不利于观察。混合纤维素微孔滤膜MCEM) 简称混合膜,是一种多孔性的薄膜过滤材料,具有亲水性,微孔结构均匀,孔隙较小,常用于水系溶液的过滤。

对于微囊藻、小球藻等细胞较小(直径< 5 pm)的液体单细胞藻类样品,常用的滤纸吸附粘台法难以取得良好的冷冻扫描电镜观察效果[1],急需探索新的粘台方式以优化制样条件。

与滤纸相比,混合膜的孔径较小且孔隙分布比较均匀,可以更好地吸附和收集较小的藻细胞,对样品浓度和体积的要求低,适用于细胞浓度较低的样品(例如自然水体中采集的水样)。电镜下观察混合膜上吸附的细胞形态饱满、分布均匀、杂质较少、与背景反差明显,成像效果优于滤纸吸附。

混合膜正反两面的超微结构不相同,但两面均可有效富集藻细胞并获得满意的冷冻扫描电镜观察效果。放大5 000倍时,混合膜正面的细胞比较稳定,可以用分辨率最高的扫描模式成像,获得的图像细节最丰富;而混合膜反面和滤纸上的细胞由于电子束的轰击发生荷电位移,只能用快速扫描模式成像,图像质量略差。因此,如果对放大倍数要求较高,建议使用混合膜正面来吸附细胞。


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